全光谱流式细胞分析仪-南京医科大学大型仪器

该仪器的核心在于Cytek专利全光谱分析（Full Spectrum Profiling, FSP）技术，通过完整捕获荧光染料的发射光谱而非仅检测峰值，实现对任意商用荧光染料的灵活兼容，无需更换光学滤片即可自由组合多色panel，在3激光配置下最高可开展24色免疫分析，显著降低实验成本与 setup 时间。系统搭载自发荧光去除（Autofluorescence Extraction）模块，利用先进解混算法从肿瘤、酵母等高自发荧光背景样本中提取真实信号，极大提升弱阳性细胞群及低表达分子的辨识度；同时配备小颗粒检测模块，凭借高功率405 nm激光与紫光侧向散射通道，可对病毒、外泌体等100 nm级纳米颗粒进行多参数综合表征，支持ViroFlow等病毒颗粒定量应用。SpectroFlo软件提供实时解混（Live Unmixing）功能，可在采集过程中即时完成光谱拆分与数据呈现，并具备可移植实验模板、可重复使用参考对照库、自动化Daily QC及审计追踪等功能，确保跨仪器、跨实验室的数据一致性与标准化。

1. 激光器配置：配备405nm、488nm、640nm激光器，对荧光染料兼容性强，可实现多色免疫分析，对弱阳性表达细胞群具有很好的辨识度；

2. 荧光检测通道：最多38个高分辨率荧光检测通道，配备雪崩光电二极管（APD）检测器，其中405 nm激光对应16通道检测模块（420–829 nm非均匀谱宽），488 nm对应14通道（498–829 nm），640 nm对应8通道（652–829 nm），采用专利CWDM半导体检测器阵列实现全光谱捕获；

3. 散射光检测器：3个散射光检测通道，包括前向散射光检测器（FSC）、蓝光侧向散射光检测器（SSC-B）和紫光侧向散射光检测器（SSC-V，专用于小颗粒检测）；

4. 荧光检测线性：FITC检测线性R² ≥0.995，PE检测线性R² ≥0.995；

5. 样本流速：低速15 μL/min、中速30 μL/min、高速60 μL/min、孔板高通量模式100 μL/min；

6. 数据采集速度：35,000 events/s；

7. 样本通量：支持5 mL流式管和96孔微孔板；高通量模式下约27分钟完成96孔板分析；

8. 交叉污染率：标准模式≤0.3%，低速低残留模式≤0.1%；

9. 体积法绝对计数：利用体积上样模式可精确计算每μL样本浓度，无需微球；

10. 检测灵敏度：全光谱检测及紫光侧向散射检测器在增强型小颗粒检测（ESP）选项支持下，可检测70 nm的纳米颗粒，能从背景噪声中分辨0.2 μm微球。

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上机前须确保样本为单细胞悬液或单分散纳米颗粒悬液，细胞样本建议浓度约1×10⁶ cells/mL、体积300 μL，并经40 μm滤膜过滤去除团块；纳米颗粒样本建议粒径不超过1000 nm，浓度控制在1×10⁷–1×10⁹ particles/mL，上样体积10–100 μL，未知浓度样品应进行10倍梯度稀释后由低到高依次检测；鞘液须使用去离子水或专用鞘液，并经0.22 μm（小颗粒检测推荐0.1 μm）滤膜过滤，确保无颗粒及气泡，鞘液桶根据样本量适量添加，废液超过一半须及时清空；上样前将样本涡旋混匀5 s，采集时样本量较少可选用中速，样本浓度较高必须稀释后使用低速，严禁在高浓度状态下使用高速，以防管路堵塞；每次采样后务必执行1–2次SIT Flush清洗上样针，样本间需充分润洗，纳米颗粒检测结束后建议用洗液Boosting 60 s并以纯净水润洗毛细管管头，防止交叉污染；实验结束后须按规定执行关机清洗程序（10% NaClO 2.5 mL + 30% Contrad 1.6 mL + 水3 mL），禁止将腐蚀性溶液滞留流动池过夜；每次开机建议运行Daily QC，使用Cytek QC微球进行质控，确认Event Rate在100–1000之间且报告通过后方可正式实验；数据须及时导出并清理，使用格式化U盘拷贝，禁止私自处理仪器故障。

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