分子互作检测仪-南京医科大学大型仪器

Biacore 8K是一款高通量、高灵敏度的无标记分子互作分析系统，专为药物筛选、亲和力/动力学表征及质量控制设计。其核心特色在于8针16通道并行架构，可在单次运行中同时检测8种不同靶点，显著缩短复杂样品（如细胞上清、GPCR、双特异性抗体）的实验周期；配合Biacore Insight软件，提供从靶点验证、分子库筛选、表位分组到浓度定量、相对效价测定的一体化解决方案。系统支持2D动力学方法学，单对互作详细动力学表征仅需35 min，无需繁琐的 assay development；同时内置缓冲液自动分选器与在线脱气功能，可在多种缓冲液间无缝切换。该仪器广泛应用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-核酸、抗体-抗原、小分子-靶点及细胞/病毒等互作研究，满足生物药物开发各阶段（从苗头化合物筛选到批次放行）的合规需求，并可配置GxP模块以适应监管环境。

1. 检测原理：基于表面等离子共振（SPR）生物传感器技术，实现无标记、实时分子互作检测。

2. 进样系统：8根进样针，16个流通池（8通道×2），支持8组样品平行检测，通量较单针系统提升8倍。

3. 灵敏度：基线噪声<<0.02 RU（RMS），浓度检测限低至1 pM，对有机小分子无分子量下限。

4. 动力学范围：结合速率常数（ka）蛋白质最高达10⁹ M⁻¹s⁻¹、小分子最高达10⁷ M⁻¹s⁻¹；解离速率常数（kd）覆盖10⁻⁶–0.5 s⁻¹；亲和力（KD）范围10⁻³–10⁻¹⁵ M。

5. 温控系统：分析温度4–40 °C（最大低于室温20 °C），样品舱温度4–40 °C（最大低于室温18 °C），温控精度0.003 °C。

6. 流速与进样：流速1–100 μL/min，进样体积1–200 μL，流通池体积40 nL、高度70 μm。

7. 样品载量：支持4块96孔或384孔标准板/深孔板（8K+型号扩展至12块），最多容纳1,536个样品（8K+可达4,608个）。

8. 数据采集：频率1或10 Hz，响应信号动态范围1–70,000 RU，自动在线参考扣除、零浓度扣除及溶剂校正。

9. 运行效率：清库筛选（384孔板）约1 h，64个样品动力学分析约4–5 h，支持60 h无人值守运行（8K+可达72 h）。

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上机前须确保样品为澄清溶液，避免含有颗粒、气泡或高浓度DMSO（>5%可能影响折光率），细胞上清等粗样品建议经离心过滤处理，但非肿瘤细胞或低黏附性粗样品可直接检测。配体固定阶段须根据分子类型选择合适偶联方式（氨基偶联、巯基偶联、捕获法等），并严格控制固定量以获得理想RU值；分析物浓度应覆盖预期KD的0.1–10倍，未知样品建议进行预实验梯度稀释。运行过程中须使用0.22 μm过滤的脱气缓冲液，定期更换并避免缓冲液结晶堵塞流路；每次实验后执行标准再生程序，确保芯片表面可重复再生使用（通常>100次）。温控模块需提前预热至设定温度，样品舱应保持全程低温以维持蛋白活性。实验结束后须按规定执行清洗与关机程序，使用配套标准品进行Daily QC或定期性能验证，确认基线噪声、漂移及结合/解离速率符合指标；数据须及时通过Biacore Insight软件导出备份，禁止私自修改系统配置或分析参数，确保结果的可追溯性与GxP合规性。

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